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常见血细胞分析仪的检测原理与直方图/散点图

血细胞分析仪检验图形:根据检测原理不同,分为直方图和散射图两种细胞分布图形。 


【第一部分】血细胞直方图(Histogram)

希森美康/迈瑞血细胞分析仪常规检测红细胞/血小板的技术为电阻抗原理,又称库尔特原理):

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如上图所示,悬浮在电解质溶液中的血细胞相对于电解质溶液是非导电的颗粒,当体积不同的血细胞(或类似颗粒)通过计数小孔时,可引起小孔内外电流或电压的变化,形成与血细胞数量相当、体积大小相应的脉冲电压,从而间接区分出血细胞群,并分别进行计数。


血细胞直方图,其横坐标为血细胞体积大小,纵坐标为不同体积细胞的相对频率,是表示细胞群体分布情况的统计图形。它可以显示出某一特定细胞群的平均细胞容积、细胞分布情况及有无明显异常细胞群的存在。

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直方图观察的内容:

①峰的位置,反映主细胞群的位置有无异常。

②峰的高低,大致反映主细胞群数量的多少。

③峰底的宽度,反映细胞群容积大小的不均一性或离散程度大小,如RDW、PDW等。

④有无异常峰出现,和正常直方图相比有异常峰出现,多提示血液中有异常细胞群或干扰因素存在。

⑤峰的起始处或结尾处有无异常,若有多提示有干扰因素。


(一)红细胞直方图

正常红细胞直方图是一条近似正态分布的单峰曲线,通常位于36~360 fl 范围内,横坐标表示RBC体积,纵坐标表示不同体积红细胞出现的频率。

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正常红细胞集中在50~200 fl 范围内,可见两个细胞群体:一个是红细胞主群,从50~125 fl ,为一个两侧基本对称、较狭窄,呈现倒扣钟状的正态分布曲线;另一群是大细胞群,位于主群右侧不与X轴重合拖尾部分,分布在125 fl ~200 fl 区域,又称“足趾部”,是一些大红细胞、网织红细胞、红细胞的二聚体、多聚体及白细胞的混合物。

异常红细胞直方图(图2-11):

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以小编的工作经验,上图中给出的巨幼细胞性贫血的红细胞直方图,曲线顶点低的太夸张了;

下图为小编在工作中遇到的一例明确诊断为巨幼贫的红细胞直方图:

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另外,特别典型的红细胞双峰(明显有两个峰顶,如下图),

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还可见于缺铁性贫血治疗有效(补铁)、巨幼细胞性贫血治疗有效(补维生素B12和/或叶酸)、输血后等。


(二)血小板直方图

正常血小板直方图是一个偏态分布的单峰光滑曲线,通常在2~30fl范围内,主要集中在2~15fl。

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当血标本中存在大血小板、血小板聚集、小红细胞、红细胞碎片时,可出现异常血小板直方图(如图2-12)。

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【第二部分】血细胞散点图

希森美康/迈瑞血细胞分析仪的白细胞分群原理:

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溶血剂使白细胞的细胞膜轻微受损,此时可利用荧光染料对各类白细胞进行染色,再运用“鞘流”“扫流”技术,使混悬在样品中的白细胞单个成束排列通过激光检测器,对白细胞的参数进行分析,获取前向散射光(反映细胞大小)、侧向散射光(反映细胞内部结构)和侧向荧光(反映细胞内核酸/细胞器的种类与多少)三种信号,根据这三种参数区分各类白细胞。

总之,希森美康/迈瑞五分群血细胞分析仪在测定血细胞参数的同时,还可打出直观白细胞分类彩色的散射图,也称散点图。

散点图观察的内容:

①在分析图形时应注意与正常图形比较,结合细胞参数、报警提示综合分析。

②注意观察散射图各个细胞群区域的大小、密度、颜色深浅。特别要注意除正常细胞群以外区域有无细胞群出现。


一、白细胞散点图

(一)4 DIFF(四分群)通道散点图

利用半导体激光流式细胞术、核酸荧光染色技术,采用溶血剂完全溶解红细胞和血小板,白细胞膜仅部分溶解。聚亚甲基蓝核酸荧光染料进入白细胞内,使DNA、RNA和细胞器着色。因为荧光强度与细胞内核酸含量成比例,所以未成熟粒细胞、异常细胞荧光染色深,成熟白细胞荧光染色浅,从而得到4DIFF(四分群)白细胞散点图(如下)。

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最新的XN系列中,与该通道对应的是WDF通道,散点的分布基本一致,不同之处在于:

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XN系列的溶血素试剂溶血能力更弱,在单核细胞膜上打的孔小于XE/XT系列,使单核细胞内容物复杂程度增加,同时增加倾斜度,能更好的区分淋巴细胞和单核细胞。

迈瑞BC-6000/6000plus系列也有与之类似的通道。

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(二)WBC/BASO通道散点图

在碱性溶血剂作用下,除嗜碱性粒细胞外的其他所有细胞均被溶解或萎缩,经流式细胞术计数,可得到WBC/BASO百分率和绝对值及WBC/BASO散点图(如下)。

最新的XN系列无此通道,而迈瑞BC-6000系列有与之类似的通道。

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(三)未成熟髓细胞信息通道(IMI)散点图

采用射频、电阻抗和特殊试剂结合法。在细胞悬液中加硫化氨基酸,幼稚细胞膜脂质含量高,结合硫化氨基酸的量多于较成熟的细胞,对溶血剂有抵抗作用。加入溶血剂后,成熟细胞被溶解,只留下幼稚细胞和异型/异常淋巴细胞(如下图),报告百分率和绝对值,并提示核左移。

希森美康最新的XN系列无此通道。

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(四)散点图解读

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注意上图中的D部分,希森美康老系列仪器和迈瑞BC-6000系列仪器都有专门的有核红细胞通道,散点图分布也类似。但该通道需要配备专门的有核红细胞试剂,故限制了其应用。


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